Prélèvement d'échantillon | Whatman
Cartes de taches de sang séché Whatman de Millipore Sigma, validées par Metabolon
Les cartes Whatman 903 sont bien établies dans les tests cliniques (dépistage des nouveau-nés) et sont faciles à utiliser et se prêtent à la fois au prélèvement à domicile et à une manipulation aisée en laboratoire. L'utilisation des cartes de taches de sang séché comme technique de prélèvement sanguin est bien adaptée aux situations dans lesquelles les conditions de stockage ultra-froid (glace sèche ou réfrigération) nécessaires pour le plasma ou le sérum ne sont pas réalisables. Elles constituent également une alternative viable aux visites en clinique, car elles peuvent être préparées de manière fiable dans le cadre d'un processus de prélèvement à domicile, à l'initiative du patient. En outre, les cartes DBS sont bien adaptées au traitement de volumes d'échantillons limités et constituent une méthode moins invasive, ce qui rend les études longitudinales et pharmacocinétiques nécessitant des prélèvements fréquents plus viables.
Figure 1. Profils métabolomiques du plasma et du DBS ventilés par Super pathway, pour les substances biochimiques détectées dans au moins 70 % des échantillons de chaque matrice dans une cohorte de 49 donneurs.
Sensibilité et précision des cartes Whatman pour taches de sang séché
À titre de comparaison directe, nous avons tabulé le nombre de substances biochimiques nommées qui ont été détectées dans chaque série d'échantillons (DBS et plasma). La figure 1 illustre la similitude de la composition du Super Pathway entre les échantillons de plasma et de DBS. Nous reconnaissons que les cartes DBS (sang total) et le plasma sont des matrices différentes et qu'il n'est pas recommandé de les comparer directement. Cependant, même avec ces différences inhérentes, nos données soutiennent la conclusion que les profils métabolomiques sont similaires entre le plasma et le DBS, et que les signatures métaboliques connues détectées dans le plasma sont maintenues dans les échantillons de DBS. Pour plus d'informations, téléchargez notre livre blanc.
Stabilité des cartes de Whatman pour taches de sang séchées
La stabilité à court terme (STS) des métabolites dans les taches de sang séché a été évaluée à l'aide d'un ensemble de cartes DBS préparées en vrac à partir d'un seul pool de sang total (WB) pendant une période allant jusqu'à 28 jours. La stabilité à long terme (LTS) a été évaluée dans 17 lots de cartes DBS (taches de 25 µL de sang veineux disodique EDTA) qui ont été stockées jusqu'à 7 mois à température ambiante et à -20°C, et analysées après la préparation initiale (T0), après 3 mois et après 7 mois. Environ 95 % des composés sont stables ou se stabilisent dès la troisième semaine de stockage, quelle que soit la température. Lisez notre livre blanc pour plus de détails.
Figure 2. Proportion de substances biochimiques à chaque température classées dans chaque catégorie de stabilité à court terme. Le vert indique la stabilité entre les jours 1 et 28, le bleu indique la stabilité après 12 à 21 jours de stockage, et le rouge indique une stabilité limitée ou nulle au cours de la période de stockage de 28 jours. RT, température ambiante ; WB, sang total liquide. STS, effet de stabilité à court terme.
Robustesse des cartes de Whatman pour taches de sang séché
L'une des principales différences entre les cartes DBS et le plasma ou le sérum est l'inclusion du composant cellulaire du sang total (c'est-à-dire l'hématocrite ; HCT). Dans des circonstances normales, ces cellules représentent environ 35 à 50 % du volume total chez les adultes.1,2 L'éventail des proportions de globules rouges dans un punch DBS standard dont le profil est établi à l'aide de la métabolomique est potentiellement large, et les différences d'hématocrite peuvent affecter le DBS de multiples façons. Metabolon a validé l'utilisation des cartes Whatman 903 en tant que matrice viable pour la métabolomique globale non ciblée à l'aide de son Global Discovery Panel. De multiples variables ont été évaluées pour déterminer les limites et les risques des essais DBS, notamment le volume de spot, l'emplacement du poinçon, l'HCT et l'expédition dans des conditions de chaleur et d'humidité élevées. Des études bien conçues permettent de minimiser l'effet de ces variables. Pour plus d'informations, téléchargez notre livre blanc.
Détection des signatures métaboliques dans les cartes de taches de sang séché
En comparant les cartes de plasma et de DBS, il est important de s'assurer que les signatures métaboliques connues du plasma sont détectées de manière fiable dans le DBS.Nos expériences de validation biologique ont indiqué que les échantillons de DBS maintiennent le métabolisme à jeun(figure 3) et permettent de détecter les marqueurs courants du diabète ainsi que des marqueurs spécifiques de l'apport alimentaire, du stress et d'autres marqueurs du mode de vie, ce qui souligne la valeur du DBS dans la recherche sur le métabolisme.
Figure 3. Les niveaux du marqueur de stress ophtalmate et du corps cétonique 3-hydroxybutyrate (BHBA) au cours d'un jeûne hydrique de 4 jours montrent la précision et le maintien des signatures métaboliques au sein des individus au fil du temps à l'aide des cartes DBS.
Références
1. Mondal, H. et D.P. Budh, Hematocrit, in StatPearls. 2021, StatPearls Publishing : Treasure Island (FL).
2. Billett, H.H., Hemoglobin and Hematocrit, in Clinical Methods : The History, Physical, and Laboratory Examinations, H.K. Walker, W.D. Hall, and J.W. Hurst, Editors. 1990, Butterworths : Boston.
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